[摘要] 目的 建立链霉素在牛奶中残留的微生物学检测方法。方法 采用微生物测定法定量检测牛奶中链霉素残留量，样品前处理用10%（m/v）三氯乙酸作为提取液，采用冷冻离心，使牛奶中残留链霉素得到提取和分离。结果 链霉素在0.10~3.20u/mL的浓度范围内具有良好线性关系（r=0.9981）,牛奶中3种添加浓度0.20、0.80、1.60 u/g的平均回收率为 97.6%（n=9）， 3种添加浓度0.20、0.80、1.60u/g 各自的RSD为：1.6 %，3.7 %，1.2 %（n=3）。结论 本方法可用于牛奶中链霉素残留的检测。
[关键词] 链霉素；牛奶；微生物学检测；三氯乙酸；冷冻离心
链霉素属于氨基糖苷类抗生素，用于革兰氏阴性菌和结核杆菌感染，在治疗家畜感染性疾病中发挥了重要作用，但抗生素的耐药性日益增强，并且毒副作用比较大[1]。为了加强兽药残留管理工作，保证畜产品质量安全，农业部于1999年发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，并规定牛奶中链霉素的最高残留限量（MRL）为200 ug/kg。然而，相应的链霉素检测技术并不完备，由于氨基糖苷抗生素缺少发色基团，应用到HPLC时常要对其衍生化，设备条件过高，难以普及；并且其理化测定方法相当复杂和通用性差[2]。本文采用被测样品经10%（m/v）三氯乙酸提取液震荡、浸泡，冷冻离心，沉淀，将样品中的链霉素提取于上清液中，再以枯草芽孢杆菌为检定菌，用微生物检定一剂量法测定链霉素的残留量。
1 材料和设备
1.1 试药 链霉素标准品（中国药品生物制品鉴定所 批号：0308-200012 含量：731u/mg），其余均为分析纯。
1.2 试剂 10%（m/v）三氯乙酸，25%（m/v）NaOH ，0.2mol/L NaOH，0.1mol/L磷酸，磷酸盐缓冲液（PH7.8）， 链霉素标准品贮备液（精密称取适量标准品，用磷酸盐缓冲液（PH7.8）溶解，配成1000u/mL浓度的溶液）。
1.3 培养基 营养琼脂培养基（PH7.2）（《中国兽药典》二000年版 附录68页），抗生素检定培养基II（PH8.0）（《中国兽药典》二000年版 附录68页）。
1.4 试验菌种 枯草芽孢杆菌（BaciLLus SubtiLis,CMCC 63501）。
1.5 牛津杯 不锈钢管（外径（7.8±0.1）mm，内径（6.0±0.1）mm，高（10±0.1）mm）。
1.6 设备 高速冷冻离心机(Sigma公司)，高压蒸汽灭菌锅（日本TOMY），生化培养箱(SANYO公司)，抑菌圈测定仪ZY-300IV（北京先驱威锋技术开发公司）。
详细资料下载：http://www.xqwf.com.cn/xiangjian/download/20041217.doc
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